产品货号：
SK093-2
中文名称：
线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸-辅酶Q还原酶测试盒(可见分光光度法)
英文名称：
产品规格：
25管/24样
发货周期：
1～3天
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线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 试剂一 | 25mL | -20℃ |
| 试剂二 | 5mL | |
| 试剂三 | 0.5mL | |
| 试剂四 | 25mL | 4℃ |
| 试剂五 | 1支 | -20℃ |
| 试剂六 | 2.5mL | 4℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期3个月。
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
- 准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
- 将匀浆600g，4℃离心5min。
- 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
- 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选做）。
- 步骤4中的沉淀即为线粒体，加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅱ酶活性测定。
- 分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。
- 样本测定
- 工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在1mL玻璃比色皿中加入40μL样本、100μL试剂六和800μL工作液，立即混匀，记录605nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
- 工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。复合体Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=559×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。 - 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。复合体Ⅱ活力(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=113×ΔA÷W - 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。复合体Ⅱ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.226×ΔA
V反总：反应体系总体积，9.4×10-4 L；
ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104 L/mol/cm；
d：比色皿光径，1cm；
V样：加入样本体积，0.04mL；
V样总：加入提取液体积，0.202mL；
T：反应时间，2min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万。
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